Cytek公司流式细胞仪Athena技术分析

DXP AthenaTM流式细胞仪概述

DXP AthenaTM流式细胞仪是由Cytek公司全新设计和研发,提供从2激光6色到3激光13色的灵活配置,被广泛应用于各大医院和科研单位,研究领域包括免疫学细胞检测和监控,干细胞研究和治疗、药物毒理研究等等。DXP AthenaTM因其卓越的性能和先进的设计,在该领域大放异彩。

它的优势在于:

1 . 高分辨率:结合Cytek公司最先进的DXP技术和高性能的PMT(光电倍增管),确保了仪器的高灵敏度和分辨率,能够从阴性细胞群里轻易区分弱阳性信号。从而解决传统流式中弱信号难以被识别而被认为是阴性群的情况。

2. 清洗方便:仪器面板具有一键清洗功能,做完实验进行一键清洗,仅仅需要4分钟,而且仪器具有每月自动清洗程序,可最大限度减少停机时间和简化维护流程。

3. 结果稳定:仪器配置有QbSureTM专利质控技术,可全方面监测仪器的光路噪音大小,光电转换效率,并验证激光和液路聚焦情况,综合多种参数判定仪器的分辨率。质控微球采用6峰微球,可检测所以的荧光通道,比单峰微球检测更全面。

4. 升级灵活:仪器采用可插拔式滤光片,多色组合更灵活,可由2激光6色升级到3激光13色,同时可以配置96孔板自动进样器(AMS)。实现高效便捷的样本检测。

5. 数据收集和分析沿用FLowJo软件,FlowJo软件功能强大,应用普遍,界面熟悉,操作便捷。

Athena应用示例如下:

  • 生物化学:

通过特异性标记研究分子在亚细胞器间的运输、蛋白质在细胞内和细胞间的共定位。如细胞周期蛋白表达判断细胞周期、Annexin V研究细胞凋亡。这对于传统生物化学研究是极大的补充和拓展。

示例:流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白

检测血小板膜糖蛋白(GP)可用于诊断血小板功能缺陷性疾病,如血小板物理症,巨大血小板综合症等。可采用IgG-FITC特异性标记GP蛋白进行研究。左图为正常人GP蛋白表达,右图为患者GP蛋白表达,可见患者的GP蛋白表达功能低于常人。

  • 免疫学:

免疫系统中不同类型的细胞的区别不仅是细胞表面标志物的差别,还有对于不同病原体或是刺激的反应。将流式细胞术的大样本量和直观化图像结合起来、可以有效研究T细胞和抗原递呈细胞的相互作用和免疫突触上的蛋白质聚集、化学因子诱导的形变和吞噬等。

示例:单克隆抗体阻断HLA-B27转基因大鼠T细胞活化

噬菌体文库中的单克隆HD5抗体能靶向细胞表面B272同型二聚体,进一步抑制HLA-B27转基因大鼠早期TNF产生和CD4+T细胞的扩增 。下图设定对照组(W6/32),显示了HD5阻断B272与白细胞的相互作用,并通过B272阻断CD4+T细胞的活化。

  • 肿瘤学:

通过研究淋巴细胞比例和细胞周期、凋亡和增殖等可诊断肿瘤患者的病情,Athena通过精确的数据收集和分析,多通道的多色实验,研究环境中的健康风险和药物剂量评估,可以大大推动这个研究领域。

示例:流式细胞仪检测网织红细胞观察化疗后骨髓功能变化的研究

利用流式细胞仪计数末梢血网织红细胞(Ret),并进行其RNA含量的分析,对急性白血病和恶性淋巴瘤患者化疗后动态观察骨髓红系造血活力的变化。

  • 干细胞:

在体内,干细胞具有分化成各种细胞的能力。阐明这个过程可以促使我们更好的理解动物发育的过程和制定出更好的替代受损组织的治疗方案。由于干细胞在向终末分化细胞分化过程中通常会涉及到明显的细胞形变,所以量化成像流式分析系统十分适于这方面的研究。测量维持干细胞多潜能性蛋白的细胞定位或是衡量干细胞分化过程中的信号转导事件,量化成像流式分析系统可以分析大样本量细胞的特点简化了稀有干细胞的鉴定和分类。

示例:流式细胞仪观察脉冲电磁场干预骨髓间充质干细胞的生长

采用临床上常用于治疗骨折的音频脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行照射刺激,流式检测细胞的增殖、凋亡水平和细胞周期的变化。左图为u第三代大鼠间充质干细胞培养第6天细胞周期检测结果,右图为不同时间段音频脉冲电磁场刺激后大鼠BMSCs的细胞周期变化。表明,第3,6,9天磁场干预组S期细胞百分比比对照组高,与流式细胞活率检测结果相吻合。

  • 病毒学:

病毒可以引起人的各种传染病,包括普通感冒、水痘、艾滋病和SARS等。研究病毒和宿主细胞的相互作用和在其中的复制以及病毒如何入侵和参与免疫系统,是开发抗病毒治疗方案的核心问题。Athena通过超乎灵敏的流式分析系统基于图像的多种参数可以鉴定病毒感染细胞、衡量感染在凋亡、细胞形变和细胞死亡方面的影响。

示例:AIDS患者和HIV感染者T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义

AIDS患者和HIV感染者的CD4+淋巴细胞降低,CD8+淋巴细胞显著增高,CD4+/CD8+比值倒置。左图为正常组,4区的CD4+40.9%,1区的CD8+26.9%;右图为AIDS组,4区的CD4+0.98%,1区的CD8+50.6%。

  • 微生物学:

微生物因其致病性对于人类健康和疾病预防十分重要。Athena拥有2各物理通道和13个荧光通道,能够对微生物形态变化、菌体增殖、杀菌物质效应和细菌感染对于宿主细胞信号通路和存活等进行数据统计,并结合可视化的组合视图,解决了传统方法中显微镜观察计数等方式,推动了这一领域发展。

示例:用流式细胞仪分析抗生素后效应中细菌的生物学特征。

细菌与抗生素短暂接触后会产生抗生素效应(PAE),菌体大小和核酸含量会发生变化,下图为各抗生素作用大肠埃希氏菌1h,除去药物再培养一段时间的流式检测结果。FSC显示细菌大小的变化,FL2显示细菌核算含量的变化。浅色为正常对照组,深色为实验组。

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