流式分选植物原生质体

植物原生质体是指去除细胞壁被质膜所包围的、具有活力的细胞,其结构包括细胞膜、细胞质(包括各种细胞器、细胞骨架系统及胞基质)和细胞核等部分。原生质体培养和植株再生技术具有使用范围广、可行性强等优点,是植物生物工程的基础。对植物原生质体的研究,可追溯到20世纪60年代,英国植物学家Cocking用酶解方法降解细胞壁,获得了番茄根尖原生质体,自此原生质体的研究得到迅速发展。近年来,由于原生质体具有结构简单、发育同步性好、群体数量大、DNA分子易于进入细胞,易获得纯合性转化子的特点,及其培养技术与有关的细胞、分子和遗传等学科的交叉渗透,使植物原生质体的研究越来越受到重视。研究领域也从分离原生质体进行的生理生化和利用不同材料的原生质体得到再生植株的阶段转到原生质体的应用(尤其是遗传性状改良)方面。

由于原生质体失去了细胞壁这一屏障,因而使其具有特殊的优点。原生质体不仅可作为一个单细胞系统来研究细胞壁再生、细胞分裂与分化、摄入细胞器、病毒侵染机理、膜透性及离子转运等基础理论研究的理想材料;同时还是原生质体培养和原生质体融合的基础。而且,近年来以原生质体为材料利用膜片钳技术研究离子通道及原生质体在受光、胁迫和激素作用后的调节机制已成为研究的热点。此外,原生质体也被用来作为研究植物细胞钙信号转导及其调节机制的理想材料。

流式细胞技术在原生质体分析方面的应用主要测定原生质体大小、细胞壁生物合成、原生质体与微生物的相互作用、原生质体融合产物分选、被膜抗原的表达等。在植物细胞研究中主要应用于分选出活的原生质体,并通过分选出来的原生质体再生出植株,其中最有意义的就是选出由原生质体融合所产生的异核体。采用流式细胞术,对酸橙(Citrus aurantium L.)叶肉原生质体和甜橙(C sineniscv.Shamouti)胚性愈伤组织原生质体电融合后再生的体细胞杂种进行分析,结果表明,所有的体细胞杂种植株荧光强度是二倍体对照的两倍,这说明两者的原生质体已经融合。通过使用FCM 分析enod40转染的拟南芥属野生植物原生质体,Guzzo等发现导致前向角散射及细胞大小减少的基因有所表达,说明enod40对原生质体具有直接作用。用流式细胞术对荧光强度进行定量检测,还可以用来定位植物激素结合位点的空间分布,Yamazaki等用生物素化脱落酸(bioABA)来定位蚕豆气孔保卫细胞质膜的脱落酸感应位点,将位点用荧光素标记后,在保卫细胞原生质体表面可以观测到荧光微粒斑点,通过成像系统成功定位脱落酸结合位点的空间分布情况。

流式分选Protoplast的基本步骤

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  1. 对原生质体进行计数,调整原生质体浓度为5×106mL。
  2. 使用S3e流式细胞仪进行分选,收集GFP+原生质体。
  • 打开prosort软件,点击“start up”和“Run QC”,仪器自动完成开机和校准
  • 点击“New Protocol”,创建合适的实验方案
  • 选择“density plot”,画一张FSC/SSC散点图,再画一张GFP/PE-Texas Red散点图
  • 调节FSC/SSC电压使细胞群体出现在散点图的中央,调节FL1电压,使野生型对照原生质体群体(non-GFP) 出现在散点图的中央,GFP阳性原生质体群体会在GFP荧光通道信号更强的位置出现(在野生型对照样本中没有这个群体)
  • 如有必要,调节补偿,使GFP阴性和阳性原生质体群体分得更开。
  • 设置门,圈住GFP阳性群体。需要准备一个non-GFP原生质体阴性对照用以确定门的界限。
  • 右键点击需要分选的细胞群体,选择“left sort”,根据实验需要以及目的细胞的百分比,设置分选条件和分选模式
  1. 对分选后得到的GFP+原生质体进行离心,弃上清。
  2. 分选原生质体后续实验,分析原生质体基因组DNA,蛋白或代谢产物表达水平。

Linode上线日本东京2号数据中心

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linode日本东京机房在售罄相当长一段时间候,于2016.11.21 10:00am正式上线日本东京2号机房。截止到本文发布,2号与原1号机房的差别如下:

  • 使用KVM虚拟技术
  • 享受与其他机房相同的套餐内容(原本是其他机房的1/2)
  • 使用NTT的国际线路(tokyo 1为KDDI线路)

附上linode所有机房的测试链接

用户反馈

对于本次新开机房linode官方博客几乎是一边倒的骂声,首先是韩国用户表示新机房平均80-90的ping完全不能接受,在韩国国内运营商可是都保证10-20的ping值的(韩国大哥有没有考虑过中国用户的感受……)

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其次是台湾的用户表示还是会继续呆在1号机房,35-40ms的速度太爽了!不过KVM和套餐加倍还是很有吸引力的。

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哈哈,最后是大陆同胞的反馈。北京连1号机房80-100ms延迟(比上面台湾连2号还慢),更别谈2号150-230ms的速度了。

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总结

由于上线的新机房使用了NTT的国际线路,用户普遍反应速度没1号机房快。其实NTT国内用户也不陌生,Vultr走的也是他家的线,移动和联通还尚可,电信比较坑爹。linode的发言人也承诺现在2号机房只是刚刚上线还不是太稳定,今后会慢慢改善。让我们拭目以待!

影评——海洋奇缘(Moana)

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有一种绑架,叫“爱”。

主角Moana的父亲因为年轻时出海遇险失去了最亲的兄弟,因此从不愿意自己的女儿踏出小岛半步即使女儿对大海充满了向往。并且早早规划了女儿的未来–接替自己成为小岛的酋长。

父母,真是一种很奇怪的动物(包括我自己在内)。在孩子降生之前,他们都会信誓旦旦说:我什么都不求,只希望他一生快乐、平安。可是等他真的到来,却渐渐变成了另一回事。明明孩子天性内向,非要天天拉着他往人多热闹的地方扎,美其名曰性格养成;明明孩子更喜欢运动奔跑,非要软硬兼施按着他练琴画画写书法,把这叫做为他好。

简评

典型的美式幽默贯穿整部电影(其实我还蛮喜欢美式幽默的)。剧情老套,简洁,陈述有点拖沓,前40分钟有点像动画版歌舞剧,动不动就来那么一嗓子。人物性格刻画鲜明,配音很不错,特别是男主Maui(巨石强森配)。很多情节很有教育意义,适合带小孩一起看,当然成年人看也非常不错。

海洋奇缘的剧情简介

2016年度黑色星期五

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起源

关于黑色星期五这一叫法的起源,较普遍的一种认为看法是,由于这一天是感恩节(11月第四个星期四)后开业的第一天(也为每年11月的最后一个星期五),同时人们通常由此开始圣诞节大采购,很多商店都会顾客盈门从而有大额进帐。而传统上用不同颜色的墨水来记账,红色表示亏损即赤字,黑色则为有盈利。所以把这个星期五叫做黑色星期五,用以期待这一天过后,年度营收由负转正,由红字转为黑字。而商店的员工则使用黑色星期五这一名字来自嘲,表示这一天会忙得要死。

虽然黑色星期五这一天一般都会是一个大的采购狂潮,但基本还只能算是一年中销售额第二或第三高的一天,通常圣诞节前夜或之前的一个星期六才是最高潮。

现实

在黑色星期五这天,绝大多数商店都会清晨五、六点钟就开门,有的甚至更早。商家更会采取提前在感恩节几天前的报纸上刊登广告,发放优惠券,对商品大幅降价等措施来吸引顾客。很多消费者把这一天看作准备圣诞礼物或买到便宜货的黄金时刻,由于降价商品数量有限,很多热门商店(如沃尔玛)门前在前一天晚上就会排起长队。而商店开门的一刻也偶尔会由于过于拥挤争抢而酿成踩踏事件。

由于各商家往往到最后一刻才公布自己的降价商品清单,并把这看作商业秘密,而网络上往往在几个星期前就出现了从各种渠道得到的降价消息,从而引发了一些法律纠纷。

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今年的黑色星期五你打算如何买买买?

国外虚拟电话号码app——叮咚

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有时会遇到以下几种情况

  • 注册国外网站
  • 收发短信以验证国外手机号码
  • 和国外友人通讯
  • 只能是虚拟卡片,因为手机不支持双卡双待,而且国内无法使用国外sim卡

给大家推荐一个ios的app,叫“叮咚”。现在可以申请美国 加拿大和英国的电话号码

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比如以美国,los angels洛杉矶的电话号码。还能申请靓号,不过要加价

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资费是申请100币,另外每年需要100币来维持这个号码。在这个app内购充值了123元,1000+688=1688叮咚币。差不多等于123元可以用这个电话号码17年。。。

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