用OBD模块为汽车增加实用功能

OBD是英文On-Board Diagnostic的缩写，中文翻译为“车载诊断系统”。这个系统随时监控发动机的运行状况和尾气后处理系统的工作状态，一旦发现有可能引起排放超标的情况，会马上发出警示。当系统出现故障时，故障灯(MIL)或检查发动机(Check Engine)警告灯亮，同时OBD系统会将故障信息存入存储器，通过标准的诊断仪器和诊断接口可以以故障码的形式读取相关信息。根据故障码的提示，维修人员能迅速准确地确定故障的性质和部位。

OBD不但可以用来诊断，也可以更改添加行车电脑的各项功能。

这是淘宝买的专为丰田车制作的OBD模块，增加了一系列更人性化的功能，都是原车未曾开启的。比如挂D档4门自动落锁，倒车自动开启双闪和离车自动锁车等等。

模块非常轻巧

OBD专用接口

这是拨动针，用来调节开启关闭各项功能用。

针就是用来调节这4个功能，随意开关ON或者OFF

找到车内OBD接口。这辆10款的丰田RAV4非常的OBD就在刹车左侧，很容易找。如果是新一点的车型有可能是隐藏式的，需要拆解一些面板才能找到。

直接将OBD模块对着针眼插入，然后启动发动机即可自动读取设置。

另外说一点，最好将OBD调到“无离车自动锁”。如果开启这个功能，有时会发生发动机锁死无法点火的情况。

汽车空调滤清器/滤芯的安装方向

分2种

第一种是如下图有写明朝上的箭头UP，这种就应该根据箭头的方向放置

第二种如下图写着AIR FLOW，意思是气流方向。一般来说是按照字体正常的方向放置，比如下图就是字体朝上，箭头朝下放置。

如果实在不放心还有个解决办法。打开汽车风扇，手伸到空调滤芯的风道里去感受下风向。但是我个人试下来这招不保险，因为总感觉手心手背都是风啊。

率土之滨征服x赛季常见队伍开局转型推荐(爷爷队无效后)

先进入一段广告：率土之滨高级配将交流群，2133004

率土之滨征服x赛季常见队伍开局转型推荐今天的更新后，爷爷队因为急救效果冲突正式作古。

绝大部分赛季开服最多不到5周就结束了，之后都属于扫尾和友谊赛阶段。按照资源和战法限制来说，如果前期一直处于战斗阶段，第2周只够维持1队作战，第3周结束第二队战法都不一定能点满。而第4周结束的时候整个战局基本就能看出胜负了。所以配队不用678队，那是友谊赛的玩意儿，2-3队就够了。关键是出哪些队和出队的顺序。

新赛季前期可能会流行的队伍？嘟嘟，张机蜀步/刘备传统蜀步/汉董蜀步，法正关羽荀彧。这3队应该是新赛季最可能遇到的。所以要在前期能上榜装逼，出的队伍必须是对这3队有较高胜率的。不过先要达成一些共识：

  1. 传统蜀步干不过神兵浑水嘟嘟。
  2. 传统蜀步干不过法正关羽荀彧。
  3. 关羽队之间的对决取决于能不能先封住对手，或者自身保持洞察。

  • 马妹+洛神+吕蒙，开局

对普通玩家来说，洛神不能觉醒，否则不够CD重置2个人，所以初始技能点个3到4级就够了。缺点是打5级地战损高。

转型组合：（dps+关羽+吕蒙）/（荀彧+弓诸葛+刘备）

dps可以是自己红星比较多的输出选手，推荐夏侯渊。因为大部分人夏侯渊都很红，和史记极火也很契合。

 

  • 关妹+洛神+张机，开局

如果不怎么红，这队开局3500-4000兵力前都会比较痛苦，随时可能翻车。优点是打5稳，练级战损小。

转型组合：（dps+关羽/荀彧+张机）/（关妹+刘备+赵云/汉懂）

dps位置可以是任意你喜欢的或者红星多的输出将，推荐夏侯渊，群吕，赵云等等。上荀彧是给没关羽的一种代替，有关羽还是优先上。

 

Cytek DxP Athena 流式应用

调节性T淋巴细胞流式检测

【实验介绍】调节性T细胞（Treg）是一类具有免疫抑制作用的T细胞，约占外周血单个核细胞（PBMC）2%-5%，约占外周血CD4+T细胞的5%-10%。Treg参与免疫应答/免疫耐受调控。CD25表达于大部分的Treg细胞上，CD127是IL-7受体一部分，在Treg上低表达。
【实验方法】取100μL抗凝全血，置于流式管中，向管中加入适量荧光标记的抗体，室温避光孵育20min，再加入2mL 1x溶血素，室温避光孵育10min，1500rpm 离心5min，小心弃去上清，加3mL染色洗液（AMCS）重悬，再1500rpm离心 5min，弃去上清，再加入1mLAMCS重悬进行上机检测。
【主要试剂】CD3-BV605，CD4-FITC，CD8-APC H7，CD25-PE，CD127-APC
【实验结果】

细胞周期流式检测

【实验介绍】使用一些核酸染料和DNA进行结合可对DNA进行定量分析，G0期细胞为不参与增殖周期循环的细胞，即为静止细胞，其细胞为恒定的二倍体DNA含量（2C），G1期细胞参与细胞周期循环，其与G0期细胞DNA含量相同（2C），当细胞进入S期后，DNA含量逐渐增加，直至DNA倍增为四倍体细胞，即G2期（4C），最终进入M期，M期为分裂到2个子细胞之前。
【实验原理】正常生物细胞，DNA含量随着细胞增值，周期时相发生变化，即G0/G1期（2C）、S期（2C→4C）、G2/M期（4C）。核酸染料碘化丙啶（PI）能与DNA进行特异性结合，其荧光强度与DNA含量成正比，可以通过流式直方图来进行区分。【主要试剂】PI/RNase染色液
【实验方法】1. 消化：0.25%胰酶（无EDTA）消化，将细胞消化成单细胞；2. 洗涤：2000rpm离心5min，收集细胞，弃上清，加入3mL预冷（4℃）的PBS进行重悬、离心洗涤3次；3. 固定：加入3mL预冷的70%乙醇到细胞沉淀中，于4℃固定过夜；4. 染色：离心收集细胞，加入3mL PBS洗涤两次，加入500μL PBS（含50μg/mL PI，100μg/mL RNase, 0.2%Triton X -100），4℃避光孵育30min；5. 检测：分析前4℃避光保存样本，1h内上样。

【实验结果】

采用FlowJo软件自带的Cell Cycle工具进行分析，其中G1 mean：61979.77，G2 mean：124155.05，G2:G1=2.003。

细胞凋亡流式检测

【实验介绍】细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身程序结束其生命的过程，细胞凋亡为一种可调控的、主动的细胞死亡过程，存在多种抑制或促进凋亡的调控途径，因而可人为的诱导或抑制某些细胞的凋亡，从而达到防病、治病的目的。
【实验原理】凋亡细胞形态学发生改变，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）外翻，构成早期凋亡的重要生化特征，PS能被特异性的Annexin V-FITC探针所标记，而PI能标记凋亡中期和晚期的细胞，故两者结合可有效区分活细胞、凋亡早期、凋亡晚期和坏死细胞。
【主要试剂】Annexin V-FITC，PI
【实验方法】1. 收集细胞：培养的细胞（酶消化处理）或PBMC， 2000rpm离心5min，PBS洗涤1-2次，制备成单细胞悬液；2. 细胞染色：取细胞约105/管，洗涤后加入染色缓冲液100μL，再加入适量的Annexin-V-AF488和PI 染色液。避光孵育15min，加入染色缓冲液400μL。
【实验结果】Q2-1：活细胞、Q2-4：早期凋亡、Q2-2：晚期凋亡、Q2-1：坏死。

细胞因子流式检测

【实验介绍】细胞因子（CK）主要由免疫细胞产生，也可由非免疫细胞如内皮细胞、成纤维细胞等产生。一种细胞可产生多种CK，一种CK也可由多种细胞产生。细胞因子主要分类为：白细胞介素（IL）、干扰素（IFN）、生长因子（G）、肿瘤坏死因子（TNF）、集落刺激因子（CSF）、趋化因子等。血液中未活化的白细胞内细胞因子表达极低，当被刺激活化后，胞内细胞因子大量合成并分泌到细胞外发挥作用。
【实验原理】实验采用刺激剂（如佛波酯）来刺激细胞因子分泌，同时加入一定浓度的细胞内蛋白分泌抑制剂（如：莫能霉素），使细胞因子合成后累积在细胞内，再通过细胞固定和打孔等处理后，采用细胞因子特异性的单克隆抗体进行细胞内荧光染色。
【主要试剂】CD3-APC，TNF-α-FITC，INF-γ-PE
【实验方法】1. 对照管和检测管中均加入100μL肝素抗凝全血和100μLPRM1-1640溶液；2. 对照管加入3.4μL 1mg/mL的莫能星工作液，检测管加入5μL 1μg/mL的PMA工作液，4 μI 50 μg/ml Ionomycin 工作液和3.4 μl 1 mg/ml 莫能星工作液。3. 37 ℃，5% CO2 培养箱培养 4~6 h。4. 混匀，取出 100 μI，加入适量 CD3-APC，按照试剂盒说明进行孵育；5. 用破膜剂固定和破膜；

6. 加入适量TNF-α-FITC，INF-γ-PE，按照试剂盒说明进行孵育；

7. PBS洗涤，去上清，PBS重悬后上机检测。

【实验结果】

双阳性区域（Q2、Q6）为CD3+T细胞细胞因子分布。

γδT细胞流式检测

【实验介绍】T淋巴细胞亚群根据TCR不同可分为TCR αβT细胞和TCRγδT细胞，γδT细胞可直接识别并结合Ag分子，无需与MHC分子结合，无需APC提呈，血液和淋巴组织中γδT细胞约占总T细胞的1-5%，其执行固有免疫防御（吞噬功能），类APC作用，并分泌IL-2、IFN-γ、IL-17等细胞因子等，与同等数量的αβT细胞相比，其分泌细胞因子的能力更强。
【实验原理】活化的γδT细胞能大量表达IL-2,，结核分枝杆菌低分子多肽抗原（Mtb）能活化PBMC，增值培养后能获得较高比例的γδT细胞，用佛波酯酸（PMA）和离子霉素（IM）活化γδT细胞，检测γδT细胞内的IL-2表达情况，从而表明γδT细胞的百分比。
【主要试剂】CD3-APC、CD8-PE、IL-2-APC-Vio770
【实验方法】1. 细胞制备：分离PBMC细胞，采用RPMI培养基进行活化培养，得到Mtb活化的T细胞（MtbAT）；2. 细胞处理：1mL  PBMC（MtbAT）中依次加入PMA（20ng/ml），IM（1μg/ml），BFA（10μg/ml），37℃、5%CO2条件下培养5h后收集细胞，PBS洗涤并重悬细胞；3. 混匀，取出 100 μI，加入适量 CD3-APC，CD8-PE，按照试剂盒说明进行孵育；4. 固定破膜：用破膜剂固定和破膜；5. 加入适量IL-2-APC-Vio770，混合4 ℃避光孵育30min；

6. 洗涤：PBS洗涤2次并重悬，流式上机检测。

【实验结果】

下图Q1单阴性为TCRγδT细胞。

NK细胞流式检测

【实验介绍】自然杀伤细胞（NK）是一类不依赖抗体且无MHC限制的一类细胞，其识别靶细胞为非特异性，可释放穿孔素、NK细胞毒因子和TNF等杀伤介质，介导杀伤靶细胞，NK细胞活性可作为判断机体抗肿瘤和抗病毒感染的指标之一。在血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染患者，NK活性减低；宿主抗移植物反应者，NK活性升高。
【实验原理】NK细胞细胞是一类表达80-90%的CD16和大于95%的CD56具有调节功能的免疫细胞，常联合CD16和CD56作为NK细胞的特异性标志，本实验以外周血作为对象，运用荧光标记的抗体与待侧细胞表面的标志结合，运用流式细胞仪检测特异性荧光信号，最终获得CD3-CD16/56+的NK细胞数量和比例等数据。
【主要染料】CD3-FITC、CD16+56-PE
【主要结果】CD3-CD16+56+为NK细胞群体

间充质干细胞（MSC）流式检测

【实验介绍】间充质干细胞（MSCs）是继胚胎干细胞和造血干细胞之后具有多向分化的实用型干细胞，其具有如下特征：1）强大的增值能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等多种细胞的能力。2）免疫调节功能：通过细胞间的相互作用及产生细胞因子干扰树突状细胞功能并抑制T细胞的增殖及其免疫反应，从而发挥免疫重建的功能。3）来源多样、取材方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性。
【实验原理】hMSCs能表达CD73、CD90、CD105抗原，基本不表达CD45、CD34、CD11b、CD19和HLA-DR，实验采用荧光素标记的抗细胞表面抗原单克隆抗体（mAb）对细胞进行表染，并采用mIgG1和mIgG2b作为同型对照，流式细胞术检测其荧光强度的变化。
【主要试剂】CD105-PerCp-Cy5.5、CD73-APC、CD90-FITC、CD45/CD34/CD11b/CD19/HLA_DR-PE、mIgG1-PerCP-Cy5.5/APC/FITC、mIgG2b-PE。
【实验方法 】1. 消化：贴壁细胞使用0.25%胰酶消化，离心弃上清，加入适量染色缓冲液，使细胞浓度约5×106/mL；2. 对照：设定阴性管、同型对照管、单染管和多色样本管；3. 染色：分别加入适量的抗体，再分别加入100μL细胞悬液，室温避光孵育30min；4. 洗涤：加入300-500μL FBS洗涤2次并重悬；5. 检测：混匀后上机检测。

【实验结果】

Tube5为空白对照管、Tube1/3为单染管、Tube6/8为同型对照管、Tube7/9为多色样本管。显示，样本几乎不存在非特异性吸附，CD90和CD105阳性较强，其他未列出指标也都符合hMSC检测指标。